鼠—人嵌合抗体

一大步

利用蛋白质工程生产鼠-人嵌合抗体，

是将鼠源抗体的可变区（V区，负责结合抗原）与人源抗体的恒定区（C区，负责免疫效应功能）拼接，

从而降低鼠源抗体的免疫原性。

主要步骤如下：

1. 获取鼠源可变区基因：

从分泌特定抗体的杂交瘤细胞中，克隆出鼠源抗体的重链和轻链可变区（VH、VL）基因。

2. 获取人源恒定区基因：

从人源细胞中克隆或人工合成人抗体重链恒定区（CH1、CH2、CH3）和轻链恒定区（CL）基因。

3. 构建嵌合基因：

通过基因重组技术（如重叠延伸PCR），将鼠源V区基因分别与人源C区基因拼接，形成嵌合重链基因和嵌合轻链基因。

4. 构建表达载体：将嵌合重链和轻链基因克隆到同一个真核（常用哺乳动物）表达载体中，确保都可高效表达。

5. 转染细胞并筛选：将载体转入中国仓鼠卵巢细胞（CHO细胞）或人胚肾293T细胞。这些细胞能进行糖基化等翻译后修饰。筛选出高表达、稳定的单克隆细胞株。

6. 生产与纯化：大规模培养筛选出的细胞，收集含嵌合抗体的培养上清，用Protein A/G亲和层析等方法进行纯化。

该技术的关键是保留鼠源可变区的空间构象以维持抗原结合能力，同时引入人源恒定区以减少免疫原性。

优势在于嵌合抗体既保留了鼠源单抗的高亲和力和特异性，其70%左右的人源成分又显著降低了人体排斥反应，延长了半衰期。