<p class="ql-block">神阙散治疗痛风性关节炎的药效学研究*</p><p class="ql-block">韦兴邦1，潘国君1，林涵2，王颖莉2，李树春2</p><p class="ql-block">(1.江阴善韦生物科技有限公司，江苏 江阴 214400；2.中央民族大学，北京 100081)</p><p class="ql-block">摘要：[目的]深入探究神阙散对模型大鼠痛风性关节炎的治疗效果。[方法]通过分别建立大鼠高尿酸血症模型和痛风性关节炎模型，运用全自动生化分析仪测定大鼠体内尿酸、肌酐、尿素氮等指标，系统探讨神阙散对高尿酸血症的治疗作用；精确测定大鼠关节肿胀指数变化，并对各组大鼠的骨组织进行石蜡包埋处理，采用苏木精-伊红（HE）染色法进行病理学分析，全面评价神阙散对痛风性关节炎的治疗效果。[结果]两组实验组与对照组的各项指标均呈现显著统计学差异，充分证明造模成功。在高尿酸血症治疗方面，与模型对照组相比，神阙散各给药组在降低尿酸、肌酐、尿素氮水平上均具有统计学意义，其中神阙散中、高剂量组的治疗效果更为突出。针对痛风性关节炎，神阙散高剂量组在用药后2小时即可发挥药理作用，显著降低模型大鼠的关节炎肿胀指数，在用药后4 - 8小时治疗效果达到高峰，其疗效与痛风定胶囊和秋水仙碱相当。病理分析结果显示，神阙散低、中、高剂量组均能有效改善模型大鼠痛风性关节炎的病理状态，且呈现出明显的剂量 - 效应关系。其中，中剂量组的治疗效果与痛风定胶囊和秋水仙碱相近，高剂量组的改善作用则显著优于上述两种药物。[结论]神阙散在治疗痛风性关节炎方面具有确切的疗效，为其临床应用提供了可靠的实验依据。</p><p class="ql-block">关键词：神阙散；高尿酸血症；痛风性关节炎；药效学</p> <p class="ql-block">痛风性关节炎（GA）是一种由于血液中尿酸水平异常升高，致使尿酸盐结晶（MSU）沉积于关节囊、滑膜、软骨及骨质等关节组织，进而引发关节滑膜及周围组织病变和炎症反应的疾病。长期嘌呤代谢紊乱可导致高尿酸血症，而原发性痛风与肥胖症、高脂血症、高血压病、糖尿病、动脉粥样硬化等疾病密切相关，严重威胁人类健康。目前，临床治疗痛风性关节炎的药物主要包括秋水仙碱、解热镇痛药和糖皮质激素类药物等，但这些药物常伴随胃肠毒性、肾毒性或胃肠道出血等不良反应，给患者带来较大痛苦。因此，研发高效低毒的新型治疗药物对痛风性关节炎的治疗具有重要意义。</p><p class="ql-block">布依族是中华民族的重要组成部分，人口约300多万。在长期的发展过程中，布依族创造了独具特色的医药文化。布依医认为，气候环境、饮食及意外伤害是影响人体健康的主要因素，强调辨明病症寒热属性，采用凉性药清热、热性药散寒的治疗原则。由于布依族聚居的黔西南、黔南地区气候炎热多雨，当地人群风湿、类风湿等关节性疾病发病率较高，布依族医药在治疗外伤和关节性疾病方面积累了丰富经验。神阙散作为贵州布依族民间验方，由九节风、阴阳莲、铁马鞭等8味云贵高原野生植物药材组成，具有疏风通络、活血化瘀、软坚散结之功效。该方在临床治疗痛风性关节炎中起效迅速、治愈率高，且无明显毒副作用，但其治疗机制尚未得到科学实验验证。本研究旨在通过实验探究神阙散治疗痛风性关节炎的药效，为其临床应用提供科学依据。</p><p class="ql-block">1 材料和方法</p><p class="ql-block">1.1 实验材料</p><p class="ql-block">1.1.1 药物与试剂</p><p class="ql-block">神阙散免煎剂由中央民族大学中试实验室制备。秋水仙碱购自昆明制药集团股份有限公司；痛风定胶囊购自四川升和药业股份有限公司；氧嗪酸钾盐购自Sigma公司；酵母膏购自北京奥博星生物技术有限公司；腺嘌呤购自Sigma公司；肌酐检测试剂盒、尿酸试剂盒、尿素氮检测试剂盒均购自宁波瑞源生物科技有限公司；脱钙液采用北京中杉金桥进口脱钙液（批号ZLI - 9307）；包埋乙醇和二甲苯购自天津永大试剂有限公司；石蜡购自北京北化康泰临床试剂有限公司（熔点为56 - 58℃）；实验所用乙醇和二甲苯均由天津永大试剂有限公司提供。</p> <p class="ql-block">基金项目：中央民族大学横向科研项目资助(046 - 60323509)。</p><p class="ql-block">作者简介：韦兴邦(1958 - )，男，教授，主要从事布依族方药研究。</p><p class="ql-block">通讯作者：李树春，E-mail:jason@muc.edu.cn。 </p><p class="ql-block">1.1.2 实验动物及分组</p><p class="ql-block">选用140只健康雄性Wistar大鼠，体质量处于190 - 220g区间，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供（许可证号：SCXK(京)2012 - 0001），将其分为高尿酸血症和痛风性关节炎两大实验组，每组各70只。</p><p class="ql-block">在高尿酸血症实验中，大鼠先饲养1周以适应环境，随后根据体质量运用完全随机法分为7组，并连续给药1周。其中，造模前溶媒对照组以蒸馏水作为模型对照；造模后溶媒对照组在造模基础上进行蒸馏水灌胃，作为给药对照；西药对照组给予秋水仙碱，剂量为0.15mg/kg（按体质量计算）；中药对照组给予痛风定胶囊，剂量为624mg/kg（按体质量计算）；神阙散设置多个剂量组，高剂量组为504mg/kg，中剂量组为252mg/kg，低剂量组为126mg/kg，低剂量1/2组为63mg/kg（均按体质量计算） 。</p><p class="ql-block">在痛风性关节炎实验中，用药组大鼠同样分为7组，分别为正常组（以生理盐水模拟造模操作）、对照组（在造模基础上给予生理盐水灌胃）、西药对照组（秋水仙碱组）、中药对照组（痛风定胶囊组）、神阙散高剂量组、中剂量组和低剂量组，每组10只，各给药剂量与高尿酸血症实验一致。</p><p class="ql-block">1.1.3 实验仪器</p><p class="ql-block">本实验所用仪器包括：常州市衡正电子仪器有限公司的电子称；东芝公司的TAB - 40F2型全自动生化分析仪；北京白洋医疗器械有限公司的离心机；济南益延科技发展有限公司的yls - 7b型足趾容积测量仪；日本奥林巴斯的BX51T - PHD - J11型显微镜及CMOS；美国Media Cybernetics公司的Image - Pro Plus多功能真彩色细胞图象分析管理系统；德国莱卡RM2015型石蜡切片机；日本三洋MDF - 382E型低温冰箱；德国Eppendorf移液器；江苏太仓医用仪器厂DSHZ - 300型恒温水浴箱 。</p><p class="ql-block">1.2 方法</p><p class="ql-block">1.2.1 模型制作</p><p class="ql-block">· 大鼠高尿酸血症模型建立：实验前先对大鼠进行1周适应性饲养，每组大鼠自由饮食1周后开始给药。给药前精确称量大鼠体质量，除正常组灌胃给予蒸馏水外，其余各组均灌胃酵母膏（18g/kg，按体质量计）与腺嘌呤（100mg/kg，按体质量计）。在各组取材前1小时，给予氧嗪酸钾盐（300mg/kg） 。</p><p class="ql-block">· 大鼠痛风性关节炎模型建立：在无菌操作环境下，将5mmol/L的氢氧化钠（NaOH）溶液与800mg尿酸钠加入155mL去热原灭菌注射用水中，煮沸促使尿酸钠完全溶解。待溶液自然冷却并持续搅拌，逐滴加入1mol/L的盐酸（HCl）调节pH值至7.0，此时溶液呈乳白色。随后进行多次离心操作（3000r/min，每次2分钟），将溶液于4℃冷却1小时后再次离心，收集所得晶体至无菌EP管，4℃保存备用。烤干上清、烧杯、搅拌棒和离心管并称重，通过差值计算及氯化钠生成量换算，得出实际晶体重量。将尿酸盐结晶（MSU）晶体溶解于磷酸盐缓冲液（PBS）中，配制成所需浓度溶液。参照大鼠急性痛风性关节炎模型构建方法，对大鼠实施麻醉后，选取右踝关节外侧后方为穿刺点，以45°夹角（针头斜面朝前上方与胫骨方向）将4.5号针头刺入踝关节腔，向关节腔内一次性注入50μL浓度为20g/L的MSU溶液 。</p><p class="ql-block">1.2.2 高尿酸血症及痛风性关节炎的评价</p><p class="ql-block">· 高尿酸血症实验：分别在实验前及实验第7天，通过眼内眦静脉采集大鼠血液样本，以23cm离心半径、2500r/min转速离心5分钟。每份血样取200μL上清液，用于测定血清尿酸、肌酐、尿素氮水平 。</p><p class="ql-block">· 痛风性关节炎实验：用药组大鼠在诱发模型前5天起开始灌胃给药，每日1次，连续7天。分别于给药后第2、4、6、8、24、48小时，观察大鼠关节肿胀指数变化并进行组织病理分析。关节肿胀指数计算公式为：（测定时间点关节周径 - 初始周径）/初始周径。具体操作时，使用2 - 3mm宽纸条和游标卡尺测量关节周径。此外，取各组大鼠清洗干净的骨组织，置于10倍体积的脱钙液（采用乙二胺四乙酸（EDTA）脱钙液）中，每周更换脱钙液，定期检查骨组织酥软程度（以大头针可轻松扎入为判断标准）。脱钙完成后，依次进行固定、脱水、石蜡包埋、切片处理，随后进行脱蜡、复水及苏木精 - 伊红（HE）染色，在显微镜下观察、采集图像并分析。治疗结束后，处死所有实验动物，按上述方法取材并记录相关数据 。</p><p class="ql-block">1.2.3 统计学处理</p><p class="ql-block">实验数据均以“均数±标准差（x±s）”形式呈现，运用SPSS20.0统计软件进行数据分析。计量资料采用（x±s）表示，组间差异采用单因素方差分析（ANOVA）。若组间方差齐，采用LSD法进行两两比较；若方差不齐，则采用Dunnett's T3法。设定检验水准α = 0.05 。</p> <p class="ql-block"> 实验结果</p><p class="ql-block">3.1 神阙散治疗高尿酸血症的实验结果</p><p class="ql-block">在尿酸实验数据中，与模型对照组相比，痛风定组、神阙散低剂量组及低剂量1/2组均呈现一定程度的尿酸水平变化，但未达到显著统计学差异。而神阙散中剂量组和高剂量组，能显著降低大鼠血清尿酸水平，与模型对照组相比具有统计学意义（P < 0.05） 。 3.1 神阙散治疗高尿酸血症的实验结果</p><p class="ql-block">在尿酸水平检测中，相较于造模后溶媒对照组，除神阙散低剂量组及低剂量1/2组外，其余给药组尿酸水平差异均具有高度统计学意义（P<0.01）。这表明秋水仙碱组、神阙散高剂量组和中剂量组在降低尿酸方面效果显著。在肌酐指标检测中，神阙散高剂量组及中剂量组与对照组相比差异具有统计学意义（P<0.05），说明这两个剂量组能有效降低高尿酸血症大鼠的肌酐水平。而在尿素氮检测结果中，神阙散中、高剂量组同样表现出显著的统计学差异，具体实验数据详见表1。</p><p class="ql-block">表1 神阙散对高尿酸血症模型的治疗结果（x±s）</p><p class="ql-block">组别 n 尿酸（μmol/L） 肌酐（μmol/L） 尿素氮（mmol/L） </p><p class="ql-block">造模前溶媒对照组 10 36.6±16.112** 17.3±1.159** 4.6±0.439** </p><p class="ql-block">造模后溶媒对照组 10 216.4±49.241 31.0±4.216 8.4±1.729 </p><p class="ql-block">秋水仙碱组 10 159.3±64.031* 24.4±5.103* 7.3±0.865 </p><p class="ql-block">痛风定组 10 198.5±59.816 34.6±5.660* 10.2±4.516* </p><p class="ql-block">神阙散高剂量组 10 108.8±39.653* 22.4±3.893* 5.9±1.036** </p><p class="ql-block">神阙散中剂量组 10 93.6±16.853* 21.5±2.368* 6.3±1.017* </p><p class="ql-block">神阙散低剂量组 10 187.6±39.772 29.6±3.272 8.3±0.739 </p><p class="ql-block">神阙散低剂量1/2组 10 199.8±65.140 29.3±7.149 7.8±1.334 </p><p class="ql-block">注：与造模后溶媒对照组比较，P<0.05，*P<0.01。</p><p class="ql-block">3.2 神阙散治疗痛风性关节炎的实验结果</p><p class="ql-block">在痛风性关节炎实验中，除正常组外，给药前各组大鼠关节肿胀指数均呈上升趋势，符合疾病发展规律。给药2小时后，各实验组肿胀指数持续升高；4小时后，秋水仙碱组、痛风定组及神阙散高剂量组肿胀指数开始下降；6小时后，神阙散低、中、高剂量组肿胀指数均出现降低；8小时后，所有给药组肿胀指数进一步下降；至48小时，所有实验组肿胀指数基本恢复至给药前水平。从肿胀指数下降趋势来看，除神阙散低剂量组疗效相对不明显外，其余给药组均对痛风性关节炎大鼠具有治疗作用。其中，神阙散高剂量组效果显著优于其他用药组，神阙散中剂量组与痛风定组和秋水仙碱组疗效相当，具体趋势详见图1。</p><p class="ql-block"></p><p class="ql-block">通过对各组大鼠骨组织进行HE染色并在显微镜下观察（图2），正常组滑膜及周围组织形态正常，无炎细胞浸润，关节腔清晰；对照组滑膜及周围组织可见大量急、慢性炎细胞浸润，关节腔内存在大量渗出物与炎细胞，血管明显扩张充血；痛风定组和秋水仙碱组滑膜及周围组织呈现中度炎症，有急、慢性炎细胞浸润，关节腔内存在少量渗出物与炎细胞，血管扩张充血；神阙散低剂量组滑膜及周围组织同样为中度炎症，可见急、慢性炎细胞浸润，关节腔内有少量渗出物和炎细胞，血管扩张充血；神阙散中剂量组滑膜及周围组织表现为轻度炎症，仅见散在急、慢性炎细胞集中于滑膜区，关节腔内无渗出物和炎细胞；神阙散高剂量组滑膜及周围组织接近正常状态，偶见炎性细胞，关节腔清晰无炎性细胞及渗出物。</p><p class="ql-block"> 展示正常组、对照组、痛风定组、秋水仙碱组、神阙散低剂量组、神阙散中剂量组、神阙散高剂量组在×40、×100、×400放大倍数下的病理形态图片) 4 讨论</p><p class="ql-block">目前，痛风性关节炎的临床治疗药物主要包括秋水仙碱、解热镇痛药、糖皮质激素以及中药痛风定胶囊等。秋水仙碱常被视为治疗痛风性关节炎的一线药物，尤其在痛风发作初期的几小时内服用，疗效显著，24小时内有效率约达75%，但随着时间推移，药效逐渐降低 。然而，秋水仙碱的有效治疗剂量与中毒剂量较为接近，极大地限制了其临床应用的安全性。非甾体类解热镇痛药虽对痛风性关节炎有较好的治疗效果，适用于无法耐受秋水仙碱的患者，但其不良反应不容忽视，常见的包括过敏反应、消化道出血等。此外，有消化性溃疡病史、肾脏疾病、肝脏疾病、心功能不全的患者，以及正在服用抗凝药物的人群均需谨慎使用，老年患者同样应慎用。糖皮质激素类药物虽能快速缓解症状，但停药后病情易复发，且长期使用会引发多种不良反应。由此可见，西药在治疗痛风性关节炎过程中存在诸多局限性。近年来，中医药在改善痛风性关节炎症状、控制病情发展方面展现出独特优势，具有安全性高、复发率低等特点。例如，中药制剂痛风定片可有效减轻关节红肿热痛症状，显著降低血尿酸水平，且临床应用中未发现明显不良反应。</p><p class="ql-block">布依族作为贵州的原居民族，在长期与疾病斗争的过程中，积累了丰富的民族医药经验，形成了诸多针对当地多发病的有效方剂。布依医药理论认为，痛风性关节炎的发病机制主要为外感风寒湿邪，致使经络阻滞，同时内因在于气血亏虚。风、寒、痰、湿、热、虚等多种致病因素相互作用，导致血瘀络阻，病变主要累及脾肾两脏。国医大师朱良春也指出，痛风的根源是浊毒瘀滞于血脉，无法正常排泄，体内水谷精微代谢失常，浊毒内生并滞留于血液，最终形成瘀结致病。神阙散作为布依族治疗痛风性关节炎的经典验方，其组方独具特色。方中的九节风具有清热解毒、凉血消斑、活血化瘀、祛风除湿通络之效。既往研究表明，九节风可能通过稳定内皮细胞代谢活性，调节因内毒素休克或尿酸盐刺激引起的血管内皮细胞分泌功能紊乱，抑制白细胞介素 - 1（IL - 1）等炎症因子的过度释放，阻断炎症级联反应，从而发挥治疗作用。阴阳莲提取物则可通过抑制黄嘌呤氧化酶活性，减少尿酸生成，降低血清尿酸水平；同时，还能显著降低急性痛风性关节炎中炎性因子含量，缓解炎症症状，阻止炎症进一步发展。</p><p class="ql-block">本研究通过动物实验证实，神阙散能够有效治疗模型大鼠的痛风性关节炎。在显著降低高尿酸血症大鼠尿酸、肌酐和尿素氮水平的基础上，对急性痛风性关节炎也具有确切的治疗效果。相较于现有的痛风性关节炎治疗药物，神阙散展现出明显的治疗优势。此外，课题组前期开展的安全性评价研究结果表明，神阙散安全无毒副作用，这使其成为治疗痛风性关节炎极具潜力的理想药物。本研究为神阙散治疗痛风性关节炎提供了坚实的实验依据，也为该方剂进一步的开发应用奠定了重要基础。</p> <p class="ql-block">参考文献</p><p class="ql-block">[1] Gentle MJ. 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