粪便隐血实验双抗体夹心法科普

Kobe

粪便隐血试验(fecal occult blood test,FOBT）：上消化道出血量<5ml，粪便中无可见的血液，且红细胞被破坏，显微镜检查也未见到红细胞。需用化学法、免疫法等才能证实的出血，称为隐血。检查粪便隐血的试验称为粪便隐血试验。

一.方法：

化学法：邻联甲苯胺法、邻甲苯胺法、还原酚酞法、愈创木脂法、匹拉米洞法等。

免疫法：血红蛋白法、转铁蛋白法等。 两种方法在方法学上互补，故大多数单位采用化学法+免疫法联合检测的方法。 二、原理及优缺点

1、化学法——邻联甲苯胺法

原理：血红蛋白中的亚铁血红素有类似过氧化物酶的活性，能催化过氧化氢释放新生态氧，将邻联甲苯胺氧化成邻甲偶氮苯而显蓝色。

优点：

方法简便易行，成本较低，显色深浅可反映出血量的多少。

缺点：

1）灵敏度较低，血红蛋白量需达到0.2～1.0mg/L。

2）特异性差，食入动物血、肉类、含过氧化物酶的蔬菜、铁剂等易导致假阳性，服用大量维生素C或其他有还原作用的药物后易导致假阴性。

2、免疫法——单克隆抗体（Hb）免疫胶体金法

原理：采用特异性的抗原抗体反应及免疫层析技术，通过双抗体夹心检测原理来定性检测标本中出现的人血红蛋白（Hb）。

优点：

灵敏度高，血红蛋白达到0.2μg/ml 或0.03mg/g粪便时，即可呈阳性结果。特异性好，不受食物、药物等因素影响。

缺点：

1）消化道大量出血时粪便血红蛋白浓度过高（>2000μg/ml ）,即抗原过剩，由于后带现象导致假阴性。

2）上消化道出血后，Hb 经胃、胰、肠等不同 pH 消化液及肠道细菌、蛋白酶的作用约 24ｈ随粪便排出体外，期间 Hb 同样易变性或消失，故常导致上消化道出血时FOBT假阴性。

3）Hb存在于红细胞中，红细胞破裂后，才能被释放、被检测。红细胞的破坏程度直接影响检测结果，一部分难溶性红细胞的病理性出血不易被检测。

3、免疫法——单克隆抗体（TF）免疫胶体金法

转铁蛋白（TF）为什么可用于粪便隐血的检查？

TF存在于血浆中，分子量约7.7万，属中分子量蛋白，健康人粪便中几乎不存在。因此只要其在粪便或者消化道内容物中被检测到，即说明存在消化道出血。某些消化道出血，即使出现红细胞不破裂导致Hb法检测呈假阴性，然而TF会随出血（血浆）进入到胃肠道中，用TF法则可检出。而且基础医学研究已经证实：多种癌症（包括消化道肿瘤）的血清和体液中的转铁蛋白水平升高，故由于消化道肿瘤并发的消化道出血用TF法更容易检测到。

原理：采用特异性的抗原抗体反应及免疫层析技术，通过双抗体夹心检测原理来定性检测标本中出现的TF。

优点：

1）灵敏度高，检测范围为40ng/ml~400μg/ml。

2）特异性好，不受食物、药物因素影响。

3）理化性质稳定，不易被胃酸破坏，免疫原活性不易被破坏。

缺点：

约有10%的患者转铁蛋白病理性降低，如遗传性转铁蛋白缺乏症、蛋白质丢失性疾病（肾病综合征、慢性肾功能衰竭、严重烧伤和蛋白质丢失性胃肠病）、严重肝病等，此时会导致试验假阴性。