基因工程实验（二）碱裂解法提取质粒

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　　2020年10月20日下午我们进行了第二次基因工程的实验。

从课本到实践，一边理解理论知识，一边在实践中活学活用。

在听理论知识的我们

开始做实验啦

1.用微量移液器吸取10uL菌液，接种至3mL含100ug/mL氨苄青霉素的LB液体培养基中，37℃ 200rpm摇床培养过夜

2.将3mL过夜培养的菌液转移至1.5mL 离心管内，10000rpm离心60秒，弃上清。

向留有菌体沉淀的离心管中加入250uL预冷的Buffer P1，使用移液器或涡旋振荡器充分混匀，悬浮菌体沉淀。

向离心管中加入250uL Buffer P2，温和地上下颠倒混匀5-10次，充分混匀使菌体裂解，此时溶液应变得清亮粘稠

向离心管中加入350uL Buffer P3，立即温和地上下颠倒混匀5-10次，充分混匀，此时应出现白色絮状沉淀。注意：Buffer P3加入后应立即混匀，避免产生局部沉淀。

12000rpm 离心5分钟。将所得的上清液转移到已装入收集管的吸附柱中，10000rpm离心30秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

向吸附柱中加入500uL Wash Solution，12000rpm离心30秒，倒掉收集管中的废液。

将空吸附柱重新放回收集管中，12000rpm离心2分钟，倒掉废液，将吸附柱置于室温10-15分钟，以彻底晾干。注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、PCR等）。

将吸附柱置于一个新的离心管中，向吸附膜的中间部位加入50uL Elution Buffer，室温放置1分钟，12000rpm离心1分钟，将质粒溶液收集到离心管中，-20℃保存备用。

制作:石梦瑶

提供照片:柏雪莹