柱色谱法分离苏丹红和偶氮苯

建~暨大有机化学实验

柱色谱通常在玻璃管中填入表面积很大经过活化的多孔性或粉状固体吸附剂。当待分离的混合物溶液流过吸附柱时，各种成分同时被吸附在柱的上端。当洗脱剂流下时，由于不同化合物吸附能力不同，往下洗脱的速度也不同，于是形成了不同层次，即溶质在柱中自上而下按对吸附剂的亲和力大小分别形成若干色带，再用溶剂洗脱时，已经分开的溶质可以从柱上分别洗出收集。

色谱分离基于各组分在两相之间平衡分配的差异。

吸附→解吸→再吸附→再解吸→反复多次洗脱→被测组分分配系数不同→差速迁移→分离

分配系数的微小差异→吸附能力的微小差异

微小差异积累→较大差异→吸附能力弱的组分先流出；吸附能力强的组分后流出

注意事项：

1. 整个过程中严禁将水带入装置中，为什么？

水的极性太大，会将两个色带一起洗脱下来。所以层析柱，装硅胶的烧杯必须是干燥的，接液的锥形瓶必须是干燥的。滴管必须干燥

2. 注意整个过程中始终保持液面高于硅胶面，避免干柱

进入实验室的第一件事情：打开烘箱，干燥烧杯，锥形瓶等

3.洗脱第一个色带的洗脱剂 ： 石油醚

洗脱第二个色带的洗脱剂： 5%乙酸乙酯/石油醚

首先用石油醚洗脱，待第一个色带完全洗脱之后，换用5% 乙酸乙酯/石油醚洗脱，另一干燥的锥形瓶接第二个组分。

4.实验用品：

层析柱，100-200目硅胶，烧杯。棉花，洗耳球，干燥的锥形瓶三个，干燥的烧杯两个，滴管两支；带橡皮管的玻璃棒

本实验成败的关键是：装柱要紧密，要求无断层、无缝隙；在装柱、洗脱过程中，始终保持有溶剂覆盖吸附剂；一个色带与另一色带的洗脱液的接受不要交叉。

固定相：用于与样品发生吸附作用的固定不动的物质。在混合物样品流经固定相的过程中，由于各组分与固定相吸附力的不同，就产生了速度的差异，从而将混合物中的各组分分开。

流动相：也称洗脱剂，在色谱过程中起到将吸附在固定相上的样品洗脱的作用。

样品的极性：样品与固定相的吸附能力与样品的极性密切相关。一般来讲，极性越大的化合物与固定相的吸附能力越强，越不容易被洗脱，其在固定相中的移动速度越慢；反之则越弱，越容易被洗脱。

流动相的极性：流动相极性越大，越容易将吸附在固定相上的样品洗脱，从而使样品的移动速度越快；反之则越难洗脱。

常用洗脱剂的极性对比：

乙酸>吡啶(有机碱)>水>醇类(甲醇>乙醇>正丙醇)>丙酮>乙酸乙酯>乙醚>氯仿>二氯 甲烷>甲苯>环己烷>正己烷>石油醚

柱色谱的操作步骤：

装柱→加样→洗脱和分离 → 收集各组分

2.实验步骤

一．装柱（本实验用湿法装柱，湿法上样）

1.称取4.5g 硅胶，将硅胶倒入50ML烧杯中，加入石油醚浸泡硅胶，适当搅拌，使硅胶无气泡，均匀。

2.固定层析柱，要做到 直，平。

3.用玻棒将少许脱脂棉放置于干净的色谱柱底部，轻轻塞紧,不可太紧。关闭活塞，

4.关闭活塞，倒少许石油醚于层析柱中，用玻璃棒引流，加入已经泡好的硅胶(或通过一干燥的玻璃漏斗慢慢加入吸附剂；或用烧杯小心直接倒入）。加硅胶的过程中打开活塞，下面用锥形瓶接液体，同时用带橡皮管的玻璃棒轻轻敲层析柱，使硅胶装填紧密，结实。注意整个过程中始终保持液面高于硅胶面，避免干柱。否则会产生大量气泡，影响分离效果。

5.装好之后，用石油醚空白洗脱，大约用石油醚10ML左右压实硅胶柱

二. 上样，洗脱

1. 待石油醚刚好高于硅胶面的时候（将干而未干时），关闭活塞，用滴管沿柱内壁加入5滴样品。

2.打开活塞，使样品吸附在硅胶上，样品即将全部浸入硅胶时（将干而未干时），关闭活塞，

3. 用用滴管沿柱壁加少量（ 5-10d）石油醚，再打开活塞，在液面液面刚好高于硅胶面的时候（将干而未干时），关闭活塞，

再滴加少量石油醚（5-10d），打开活塞，在液面刚好高于硅胶面的时候（将干而未干时），关闭活塞

4.加样完毕后，即可小心加入洗脱剂石油醚（注意一定要待有色物质全部吸附于吸附剂上之后才可以加入大量的洗脱剂）

用滴管沿柱壁加石油醚，打开活塞，洗脱（注意，加石油醚是一定要沿柱壁缓缓加入，避免破坏硅胶面）

随着洗脱剂（石油醚）的洗脱，可以明显看到层析柱上出现两个色带

5.待第一个色带完全洗脱之后，换用另一干燥的锥形瓶接第二个组分。洗脱液换用5% 乙酸乙酯/石油醚,加大极性，洗脱第二个色带。

三.做完之后，将硅胶倒入垃圾品，不能冲入下水道！洗干净层析柱