猪肠道大肠杆菌病：诊断、治疗和抗菌素耐药性【连载五】

猪病研究院

细菌学和细菌分离的特性

肠大肠杆菌病的诊断是基于对肠内容物样品（首选）或直肠拭子做细菌学检查。样品应接种于血琼脂和麦康凯琼脂，或者其它肠杆菌科的选择性培养基如Hektoen琼脂。这些选择性培养基可以鉴别发酵乳糖的细菌（如大肠杆菌）和不发酵乳糖的革兰氏阴性杆菌。在固体培养基上，菌落1天即可长满，形态有光滑、粗糙或黏液状。在血琼脂上的菌落特征和选择性培养基上的乳糖发酵特征给出第一个诊断提示，特别是如见溶血菌落，则常可用作ETEC腹泻的快速诊断工具。一般来说，从新生仔猪感染病例分离到的ETEC，在血琼脂上的菌落有的溶血（ETEC F4），有的则不溶血（ETEC F5，F6，F41）。而PWD病例分离的大多数溶血（ETEC F4或F18），偶尔可见到非溶血菌株。在本文作者的最近一项研究中（Luppi等，2016），从PWD的病例中分离出的ETEC，97.6%溶血，剩下的2.4%非溶血性ETEC菌株，经反复检测溶血活性，在法国、意大利和德国也存在，这些菌株归入同一个毒力类型：F4, STa, STb。

图2 ETEC F4所致的断奶后腹泻的粪便

图3 ETEC F4所致断奶后腹泻，仔猪肠道扩张、水肿和充血

图4 断奶后腹泻仔猪的胃，可见严重的充血

在大肠杆菌病中，对每一个病例都做致病菌株检测是不合理的；同时也应知道，大肠杆菌也能栖居在健康的动物身上，当然也能分离出来。因此，诊断结果必须结合临床症状和病理变化，再加上致病性大肠杆菌的分离和定量分析。基于这个原因，在纯培养或者用小肠（回肠和空肠）内容物做近似纯培养的时候，如果ETEC的浓度很高，就可诊断是大肠杆菌病。几乎所有的ETEC F4或F18都是溶血性的，所以如纯培养平板见到溶血菌落，则可作为大肠杆菌病的推定性诊断（可推定为新生仔猪的F4型和断奶仔猪的F4和F18型）。

图5 新生仔猪大肠杆菌病和断奶后腹泻的采样流程

如果仔猪已经使用抗菌药治疗，细菌学检测呈阴性，这时对结果的解释是不可靠的，应当重新用未经治疗的猪再做检查。对所分离的菌株作的纤毛和毒素的基因鉴定能够明确其在临床发病中的作用，因此颇为重要。目前很多实验室都能够用PCR方法对分离的细菌进行致病因子的基因型分析。

图6 大肠杆菌病的诊断：建议的诊断流程和标准

现在已有各种各样的引物被用于日常的PCR检测中。这些引物针对的各种毒素基因（STa，STb，LT和EAST1）、纤毛（F4，F5，F6，F18，F41）、ETEC的外膜蛋白类、肠致病性大肠杆菌（EPEC）的紧密粘附素、与水肿病有关的大肠杆菌（STEC）的Stx2e毒素（志贺毒素II型变异体e亚型）等等。有趣的是，某些F18菌株既可产生肠毒素，也能产生Stx2e毒素，这些菌株应归属于ETEC而非STEC，因其主要导致的是断奶后腹泻而不是水肿病。

图7 PWD时从肠内容物分离到的ETEC F4。注意血琼脂上的溶血现象

原题：Swine enteric colibacillosis: diagnosis,therapy and antimicrobial resistance

作者：Andrea Luppi（意大利伦巴第和罗马涅地区动物疾病预防研究所，IZSLER）

出处：Porcine Health Management (2017) 3:16

译者：唐万勇